中文名稱 : HMC-1 人肥大細胞
基本形態(tài) : 圓形
培養(yǎng)環(huán)境 : 37℃，5%CO2，95%AIR
生長特性 : 懸浮
培養(yǎng)條件 : IMDM+10%FBS+1%P/S
T25 細胞到貨處理
觀察：
1、收到細胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理：
1、75%酒精棉球擦拭細胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。
5、密度達標就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。
貼壁細胞處理：
未超過 80%匯合度時，更換新鮮培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個 T25）。
懸浮細胞處理：
1、將培養(yǎng)瓶或離心管中的細胞懸液收集至15mL離心管中1000rpm離心5min，加入1-2ml完全培養(yǎng)基重懸，按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至8-10ml/瓶，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意事項：
如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
凍存細胞到貨處理
1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。
2、將細胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細胞復(fù)蘇
1、 從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀用 5-8ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞傳代
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25）， 補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
細胞凍存
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀細胞每100萬加入1mL凍存液，混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞用程序降溫盒放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放24小時以上。
