英文名稱 ： Total Protein Thiol Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲(chǔ)存條件 ： 2-8℃
檢測(cè)方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 40 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體 40 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體 125 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體 20 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體 18 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體 3 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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粉劑一
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粉劑×1 瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說明：
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進(jìn)行二硫鍵的形成，從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。巰基還參與到氧化還原反應(yīng)中，具有重要的生物學(xué)作用。在細(xì)胞內(nèi)，巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，因此巰基也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對(duì)象。
本試劑盒測(cè)定的是蛋白質(zhì)二硫鍵斷裂產(chǎn)生的巰基和本身游離巰基的總和。還原劑會(huì)使二硫鍵裂解生成巰基，巰基會(huì)發(fā)生親核反應(yīng)，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰，據(jù)此可以計(jì)算蛋白質(zhì)總巰基含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、 研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、丙酮(AR）、蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
若樣本ΔA測(cè)定<0.01，可適當(dāng)增大樣本量后測(cè)定，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計(jì)算公式；若樣本ΔA測(cè)定>1.5，可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取100μL馬血清，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.557-0.038=0.519，
ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)總巰基含量得：
蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/mL)= 2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=2.329μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.727-0.111=0.616，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)總巰基含量得：蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=2.669μmol/g質(zhì)量。
3、取0.1078g黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=1.080-0.068=1.012，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)總巰基含量得：蛋白質(zhì)總巰基含量(μmol/g質(zhì)量)=0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=8.427μmol/g質(zhì)量。
