英文名稱 ： Protein Free Thiol Content Assay Kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/24S
儲存條件 ： 2-8℃
檢測方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體 25 mL×1 瓶
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2-8℃保存
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提取液二
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液體 25mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體60mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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液體20mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑三
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液體17mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑四
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液體2mL×1支
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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粉劑×1 支
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2-8℃保存
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產(chǎn)品說明：
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進(jìn)行二硫鍵的形成， 從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。此外， 巰基還參與到氧化 還原反應(yīng)中， 具有重要的生物學(xué)作用。 在細(xì)胞內(nèi)，巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)，因此巰基 也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對象。本試劑盒測定的是蛋白質(zhì)中的游離巰基含量。一定條件下巰基會發(fā)生親核反應(yīng)，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm處有吸收峰，據(jù)此可以計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、 研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、丙酮（AR）、蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1. 若樣本ΔA測定<0.01,可適當(dāng)增大樣本量后測定，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計(jì)算公式；若樣本ΔA測
定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
2.可使用BCA法測定蛋白濃度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、取100μL馬血清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.110-0.021=0.089，
ΔA 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557，按樣本液體體積計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得： 蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mL）=2.5×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)×F =0.399μmol/mL。
2、取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.339-0.095=0.244，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白=0.633-0.076=0.557 ,按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量）=0.25×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =1.057μmol/g 質(zhì)量。
3、取 0.1078g 黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后， 按照測定步驟操作， 用1mL 玻璃比色皿測得 ΔA測定 =A測定-A對照=0.108-0.033=0.075，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離 巰基含量得：
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g質(zhì)量）=0.25×ΔA 測定÷ΔA 標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.625μmol/g 質(zhì)量。
