英文名稱 ： α-Mannosidase(α-man)Activity Assay kit
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 100T/48S
儲(chǔ)存條件 ： -20℃
檢測(cè)方法 ： 微量法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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提取液一
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液體110mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑一
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液體15mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×2支
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-20℃保存
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試劑三
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粉劑8mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑四
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液體1.5mL×1瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明：
α-man 分布廣泛、種類繁多，在真核生物胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體中都有發(fā)現(xiàn)，不同種類、功能的 α-man 共同參與 N-聚糖的修飾過(guò)程。α-man 和特定底物發(fā)生反應(yīng)，其生成物在 405nm 處有特征吸收峰，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 α-man 活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、勻漿器/研缽、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
如果測(cè)定吸光值 A＞1.5 或 ΔA＞1，建議稀釋樣本后再測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)；如果測(cè)定吸光值 較低或接近空白 OD 值，建議增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1 、稱取 0.1 g 兔子肝臟組織，加入 1 mL 提取液， 冰浴勻漿， 12000 g ，4℃條件下離心 10 min；取上清置于冰上 待測(cè)。使用 96 孔板按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.404-0.309=0.095，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=1.3642x+ 0.0037，計(jì)算 x=0.0669 ，按公式計(jì)算活性：
α-甘露糖苷酶酶活（U/g 質(zhì)量） = x×0.1÷W×F = 0.0669 U/g質(zhì)量
2 、稱取 0.1 g 綠蘿葉片，加入 1 mL 提取液， 冰浴勻漿，12000 g ，4℃條件下離心 10 min；取上清置于冰上待測(cè)。 使用 96 孔板按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.179-0.159=0.02，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=1.3642x+ 0.0037， 計(jì)算 x=0.0119 ，按公式計(jì)算活性：
α-甘露糖苷酶酶活（U/g 質(zhì)量）= x×0.1÷W×F = 0.0119 U/g質(zhì)量
3 、 用 0.025mL牛血清按操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用96孔板按照測(cè)定步驟操作，計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管=0.107- 0.086=0.021 ，標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=1.3642x+ 0.0037，計(jì)算 x=0.0127 ，按公式計(jì)算活性：
α-甘露糖苷酶酶活（U/g 質(zhì)量）= x×0.1÷W×F = 0.0127 U/mL
